細胞生長速度變慢或細胞形態變差的原因較為復雜，可從細胞，細胞培養液，污染，操作等方面去分析。比如：細胞衰老、細胞代次過高、細胞被胰酶消化過度，細胞培養液配制或儲存不當，支原體污染，細胞接種密度低，溫度/CO₂濃度/pH等生化條件變化方面去分析，也需要考慮到血清是否有更換，血清來源不可靠，質量不穩定均會導致細胞狀態出現變化。

細胞馴化過程是細胞優勝劣汰，適者生存的過程，狀態不好或者死亡的細胞特別容易結團。在馴化過程中可以采用低速離心，自然沉降，胰酶消化，添加硫酸葡聚糖等方法逐步去除較大的細胞結團，不斷傳代馴化。另外，細胞出現結團與細胞培養基是否適應，與Ca ²⁺，Mg ²⁺離子濃度，種子細胞質量等有較大關系。

丙酮酸鈉可作為替代碳源。盡管細胞傾向于以葡萄糖作為碳源，但是在沒有葡萄糖時，細胞可以代謝丙酮酸鈉。

不添加生長因子。

內毒素的控制必須從培養基配方開發到最終生產進行全程監控。配方開發時動物源性蛋白的選擇與否、各類原材料的供應商篩選、生產車間凈化級別、生產設備和器具的消毒、物料干燥、生產過程控制、人員操作規范等全過程控制內毒素，嚴格執行 GMP 管理制度，生產高質量培養基。

對于大部分昆蟲細胞，pH 在 6.0-6.4 范圍效果較好，最適滲透壓在 345-380mOsm/kg。

（1）這是邊緣效應的體現，細胞工廠面積稍大，會有受熱不勻的情況，可以提前在工廠中加入培養液放置溫箱預熱好，現象會有所改善。

（2）目前我們的細胞工廠用的是普通材質的，較cell bind處理過的細胞貼壁生長效果會稍差一些，一般就使用一次，邊緣有少星細胞脫落影響不是很大。

建議2-3代，從復蘇時的10%NBS逐步降為無血清培養。

天信和630培養基所培養的Vero無血清細胞形態與進口培養基有一定區別，主要因為兩種培養基成分差異及天信和630培養基的冰點滲透壓高于進口培養基20%，但并不影響細胞生長與后期接毒，且天信和630培養基培養Vero細胞生長速率高于進口培養基，宿主細胞DNA、宿主細胞蛋白含量等明顯低于進口培養基，有明顯的優勢，目前暫時不做調整。

低密度接種，稍微延長培養時間，細胞也可生長至致密，但暫未嘗試低密度連續傳代，目前天信和推薦稍高密度接種，更有利于細胞狀態與增殖速度的保持。

細胞具體生長密度和細胞來源、細胞狀態、接種密度、培養基、環境控制有關，沒有比較固定的數量。但確定了具體細胞、培養基、培養條件，細胞每代數據應平行。

根據廠家提供培養基使用說明就能保證培養基安全有效。血清即可過濾前添加也可過濾后添加，具體根據無菌控制要求操作。

細胞工廠為一次性使用產品，不建議重復使用。如需反復使用，接毒后有大量完整細胞殘留，可用胰酶消化后PBS沖洗干凈輻照滅菌繼續使用；接毒后細胞破碎，可用堿液浸泡后PBS清洗干凈輻照滅菌繼續使用。

細胞消化時需要注意胰酶添加量控制，保證每1層細胞工廠有適量胰酶流入。胰酶作用消化時，密切關注細胞脫落變化情況，及時終止消化。如有輕微結團可在消化終止后用力搖晃細胞工廠的細胞懸液數次。